การส่งมอบ CRISPR/Cas9 mRNA LNPs เพื่อซ่อมแซมการลบเล็กน้อยในยีน FVIII ในหนูเมาส์ Hemophilia A

ไฮไลท์จากการประชุมประจำปี ASGCT ครั้งที่ 25

การส่งมอบ CRISPR/Cas9 mRNA LNPs เพื่อซ่อมแซมการลบเล็กน้อยในยีน FVIII ในหนูเมาส์ Hemophilia A

นำเสนอโดย: Chun-Yu Chen, PhD, Fellow-PhD | ภูมิคุ้มกันและภูมิคุ้มกัน, Seattle Children's Seattle, Washington, United States

บทวิจารณ์

ชุนหยูเฉิน¹ไช่เสี่ยวเหอ¹, แครอล เหมียว^1,2

¹สถาบันวิจัยเด็กซีแอตเทิล ซีแอตเทิล วอชิงตัน

²ภาควิชากุมารเวชศาสตร์ University of Washington, Seattle, Washington

จุดข้อมูลสำคัญ

mRNA LNPs กำหนดเป้าหมายทั้ง Hepatocytes และ LSECs
Cas9 และ sgRNA LNPs เปิดใช้งาน NSG HemA Mice เพื่อฟื้นกิจกรรม FVIII ของพลาสมาภายในร่างกาย

mRNA LNPs กำหนดเป้าหมายทั้งเซลล์ตับและเซลล์ไซนัสที่บุผนังหลอดเลือดในตับ (LSECs)

สูตรต่างๆ ของ luciferase mRNA (Luc) ที่ห่อหุ้มไว้ในอนุภาคนาโนไขมันที่มี MC3 (LNPs) เป็นหลัก ถูกฉีดเข้าเส้นเลือดดำในหนูทดลอง ส่วนใหญ่ตรวจพบการแสดงออกของ Luciferase ในตับ โดยมีการแสดงออกที่แข็งแกร่งที่สุดที่แสดงโดยสูตร LNP 5. การย้อมสีภูมิคุ้มกันของตับแสดงให้เห็นว่า LNP ที่ติดฉลาก Dil สามารถถ่ายทอดทั้งเซลล์ตับและเซลล์บุผนังหลอดเลือดได้สำเร็จ ในร่างกาย

Cas9 และ sgRNA LNPs เปิดใช้งาน NSG HemA Mice เพื่อฟื้นกิจกรรม FVIII ของพลาสมาภายในร่างกาย

Cas9 mRNA ที่ห่อหุ้มและ RNA ไกด์เดี่ยว (sgRNA) LNPs ถูกนำส่งไปยังหนูเมาส์ที่มีโรคภูมิคุ้มกันบกพร่อง (NSG HA) ทางหลอดเลือดดำ การแสดงออกที่เสถียรของ FVIII ภายในร่างกายนานถึง 4 สัปดาห์ได้รับการยืนยันโดยการทดสอบ aPTT และ FVIII ที่กลายพันธุ์ที่แก้ไขแล้วได้รับการตรวจสอบโดยการจัดลำดับดีเอ็นเอและเครื่องมือวิเคราะห์ CRISPR ออนไลน์ตามลำดับ