Частота, расположение и характер вставок вектора AAV после длительного наблюдения за доставкой трансгена FVIII в модели собаки с гемофилией A
Основные моменты виртуального конгресса ISTH 2020

Частота, расположение и характер вставок вектора AAV после длительного наблюдения за доставкой трансгена FVIII в модели собаки с гемофилией A

Пол Бэтти1, Сильвия Фонг2, Маттео Франко3, Ирен Гил-Фарина3, Аомей Мо1, Лорианна Харпелл1, Кристин Хаф1, Дэвид Херлбат1, Эбби Пендер1, София Сардо Инфирри1, Эндрю Винтерборн4, Манфред Шмидт3 и Дэвид Лилликрэп1

1Кафедра патологии и молекулярной медицины, Королевский университет, Кингстон, Онтарио, Канада.

2BioMarin Pharmaceutical, Новато, Калифорния, США.

3GeneWerk GmbH, Гейдельберг, Германия.

3Служба ухода за животными, Королевский университет, Кингстон, Онтарио, Канада.

Ключевые данные

В таблице слева показаны дозы, серотип капсида, уровни FVIII и количество сайтов интеграции (IS) для 8 собак, включенных в исследование. Через десять лет после инфузии уровни FVIII у 2 из 8 животных были <1% и колебались от 2.9% до 8.6% у других 6 животных. Сайты интеграции анализировали с использованием 2 методов (секвенирование с обогащением мишеней, TES и ПЦР, опосредованная линейной амплификацией, LAM-PCR). График справа показывает относительное распределение IS для каждого животного.

Геномную ДНК из 2 участков печени каждого животного анализировали на интеграцию вектор-геном. Интеграционные формы (вектор-геном) составляли 4.6%, а эписомальные формы (вектор-вектор) составляли 95.4% от числа считываний. Эти результаты показывают, что векторы экспрессии сохраняли преимущественно эписомальную форму через 10+ лет после инфузии.

В этой таблице показаны 10 наиболее распространенных сайтов интеграции (хромосома, размер, ген и расположение) на основе метода TES. Основываясь на обоих методах секвенирования, наиболее распространенные сайты интеграции были обнаружены в непосредственной близости от KCNIP2, CLIC2, ABCB1 и F8 гены.

СВЯЗАННОЕ СОДЕРЖАНИЕ