혈우병 A 마우스에서 FVIII 유전자의 작은 결실을 복구하기 위한 CRISPR/Cas9 mRNA LNP의 전달

ASGCT 25차 연례 회의 하이라이트

혈우병 A 마우스에서 FVIII 유전자의 작은 결실을 복구하기 위한 CRISPR/Cas9 mRNA LNP의 전달

발표자: 천춘유, PhD, Fellow-PhD | 면역 및 면역 요법, 시애틀 어린이 시애틀, 워싱턴, 미국

개요 검토

천춘유¹, 차이 샤오허¹, 캐롤 미아오^1,2

¹시애틀 아동 연구소, 시애틀, 워싱턴

²워싱턴대학교(University of Washington), 시애틀(Seattle, Washington) 소아과

주요 데이터 포인트

mRNA LNP는 간세포와 LSEC를 모두 표적으로 합니다
Cas9 및 sgRNA LNP를 통해 NSG HemA 마우스가 내인성 혈장 FVIII 활성을 회복할 수 있음

mRNA LNP는 간세포와 간 내피 정현파 세포(LSEC)를 모두 표적으로 합니다

MC3 기반 지질 나노입자(LNP)에 캡슐화된 루시페라제 mRNA(Luc)의 다양한 제형을 마우스에 정맥 주사했습니다. 루시페라제 발현은 주로 간에서 검출되었으며, LNP 제형 5에서 가장 강력한 발현이 나타났습니다. 간 면역염색 염색은 Dil-표지된 LNP가 간세포와 내피 세포 모두를 성공적으로 형질감염시킬 수 있음을 입증했습니다 생체 내.

Cas9 및 sgRNA LNP를 통해 NSG HemA 마우스가 내인성 혈장 FVIII 활성을 회복할 수 있음

캡슐화된 Cas9 mRNA 및 단일 가이드 RNA(sgRNA) LNP를 정맥내 면역결핍 혈우병 A(NSG HA) 마우스에 전달했습니다. 최대 4주 동안 내인성 FVIII의 안정적인 발현은 aPTT 분석에 의해 확인되었고 편집된 돌연변이 FVIII는 DNA 시퀀싱 및 온라인 CRISPR 분석 도구에 의해 각각 확인되었습니다.