Frecuencia, ubicación y naturaleza de las inserciones de vectores AAV después del seguimiento a largo plazo de la administración de transgén de FVIII en un modelo de perro con hemofilia A
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Frecuencia, ubicación y naturaleza de las inserciones de vectores AAV después del seguimiento a largo plazo de la administración de transgén de FVIII en un modelo de perro con hemofilia A

Paul Batty1, Sylvia Fong2, Matteo Franco3, Irene Gil-Farina3, Aomei Mo1, Lorianne Harpell1, Christine Hough1, David Hurlbut1, Abbey Pender1, Sofia Sardo Infirri1, Andrew Winterborn4, Manfred Schmidt3 y David Lillicrap1

1Departamento de Patología y Medicina Molecular, Queen's University, Kingston, Ontario, Canadá.

2BioMarin Pharmaceutical, Novato, CA, EE. UU.

3GeneWerk GmbH, Heidelberg, Alemania.

3Servicios de cuidado de animales, Queen's University, Kingston, Ontario, Canadá.

Puntos clave de datos

La tabla de la izquierda muestra la dosis, el serotipo de la cápside, los niveles de FVIII y el número de sitios de integración (IS) para los 8 perros incluidos en el estudio. Diez años después de la infusión, los niveles de FVIII en 2 de los 8 animales fueron <1% y oscilaron entre el 2.9% y el 8.6% en los otros 6 animales. Los sitios de integración se analizaron utilizando 2 métodos (secuenciación de enriquecimiento de la diana, TES y PCR mediada por amplificación lineal, LAM-PCR). El gráfico de la derecha muestra la distribución relativa de IS para cada animal.

Se analizó el ADN genómico de 2 sitios hepáticos para cada animal para la integración vector-genoma. Las formas de integración (vector-genoma) representaron el 4.6% y las formas episomales (vector-vector) representaron el 95.4% de los recuentos leídos. Estos resultados indican que los vectores de expresión mantuvieron predominantemente una forma episomal 10+ años después de la infusión.

Esta tabla muestra los 10 sitios de integración más comunes (cromosoma, tamaño, gen y ubicación) según el método TES. Basado en ambos métodos de secuenciación, los sitios de integración más comunes se encontraron cerca de la KCNIP2, CLIC2, ABCB1 y F8 los genes.

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