Παρακολούθηση τοποθεσιών ενσωμάτωσης φορέων σε προσεγγίσεις γονιδιακής θεραπείας in Vivo με προσδιορισμό αλληλουχίας θέσεων υγρού-βιοψίας-ενσωμάτωσης

Κύρια σημεία από το 28ο Ετήσιο Συνέδριο της ESGCT

Παρακολούθηση τοποθεσιών ενσωμάτωσης φορέων σε προσεγγίσεις γονιδιακής θεραπείας in Vivo με προσδιορισμό αλληλουχίας θέσεων υγρού-βιοψίας-ενσωμάτωσης

Δ Τσεζάνα¹, Α Καλαβρία¹, Λ Ρουντιλόσο¹, Π Γκαλίνα¹, G Spinozzi¹, A Magnani², Μ Πουζόλλες³, F Fumagalli¹, V Calbi¹, Μ Βίτσελ⁴, FD Bushman⁵, A Cantore¹, Ν Τέιλορ³, VS Zimmermann³, C Klein⁴, Α Φίσερ², Μ Καβατζάνα², Ε Έξι², A Aiuti¹, Λ Ναλντίνι¹, Ε Μοντίνι¹

¹San Raffaele Telethon Institute for Gene Therapy (HSR-TIGET)

²Εργαστήριο Ανθρώπινης Λεμφοαιματοποίησης, INSERM, Γαλλία

³Institut de Génétique Moléculaire de Montpellier, CNRS, Γαλλία

⁴Νοσοκομείο Παίδων Dr. von Hauner, LMU, Γερμανία

⁵Τμήμα Μικροβιολογίας, UPenn, Η.Π.Α

Βασικά σημεία δεδομένων

IS Ανάκτηση από DNA χωρίς κύτταρα καθαρισμένο από σωματικά υγρά
Χαρακτηρισμός του προφίλ ενσωμάτωσης του φακοϊού (LV) σε αιμοφιλικούς σκύλους

IS Ανάκτηση από DNA χωρίς κύτταρα καθαρισμένο από σωματικά υγρά

Το DNA απαλλαγμένο από κύτταρα (cfDNA) απελευθερώνεται στο αίμα από υγιή, φλεγμονώδη ή νοσούντα στερεά κύτταρα οργάνων (όπως το ήπαρ ή ο θύμος αδένας) που υφίστανται απόπτωση ή νέκρωση. Γενετικές αλλοιώσεις σε καθαρισμένο cfDNA, συμπεριλαμβανομένων των θέσεων ολοκλήρωσης φορέα-γονιδιώματος (IS) από κύτταρα που έχουν υποστεί μεταγωγή, μπορούν να ανιχνευθούν με προσδιορισμό αλληλουχίας θέσεων ολοκλήρωσης υγρής βιοψίας (LiBIS-seq).

Χαρακτηρισμός του προφίλ ενσωμάτωσης του φακοϊού (LV) σε αιμοφιλικούς σκύλους

Τρεις ενήλικες αιμοφιλικοί σκύλοι (Ο21, Μ57 και Ο59) έλαβαν μία μόνο ένεση LVs που εξέφραζαν διαφορετικές εκδοχές του FIX πήξης του σκύλου. Για κάθε σκύλο, το cfDNA καθαρίστηκε από ορό αίματος που συλλέχθηκε σε 7-8 διαφορετικά χρονικά σημεία ξεκινώντας από 30 έως 532 ημέρες μετά την ένεση. Αυτό το γράφημα δείχνει το εκτιμώμενο μέγεθος πληθυσμού επισημασμένων κυτταρικών κλώνων που συμβάλλουν στα κοινά IS με την πάροδο του χρόνου στους σκύλους M57 και O59.