Eine Faktor-VIII-Variante mit Eliminierung der N-Glykosylierungsstelle bei 2118 Reduzierte Anti-FVIII-Immunantworten bei mit Gentherapie behandelten Hämophilie-A-Mäusen
Höhepunkte der 25. Jahrestagung der ASGCT

Eine Faktor-VIII-Variante mit Eliminierung der N-Glykosylierungsstelle bei 2118 Reduzierte Anti-FVIII-Immunantworten bei mit Gentherapie behandelten Hämophilie-A-Mäusen

Präsentiert von: Carol H. Miao, MD, Seattle Children's Research Institute, Seattle, Washington, USA

Carol H. Miao1,4, Meng-Ni-Fan1, Shuaishuai Wang2, Junping Zhang3, Xiaohe Cai1, Ting-Yen Chao1, Le Li2, Weidong Xiao3, Barbara A. Konkle4

1Forschungsinstitut für Kinder von Seattle, Seattle, WA
2Georgia State University, Atlanta, GA
3Universität von Indiana, Indianapolis, IN
4Universität von Washington, Seattle, WA

Wichtige Datenpunkte

Inhibitorentwicklung nach Infusion von WT-BDD-FVIII und mutierten FVIII-Varianten

Hämophilie-A-Mäusen wurden hydrodynamisch Plasmide injiziert, die für mutierte FVIII-Varianten bzw. WT-BDD-FVIII kodieren. Zweite Herausforderungen wurden über hydrodynamische Injektion in allen Gruppen am Tag 86 durchgeführt. (A) Von links nach rechts die Wildtyp (WT)-BDD-FVIII-Plasmide, die für die N-zu-Q-Mutagenese verwendet wurden, die resultierenden FVIII-Variantenkonstrukte, die für in vivo verwendet wurden Gentherapie und relative FVIII-Antikörperantwort. (B) FVIII-spezifische IgG-Spiegel wurden durch ELISA nach der ersten und zweiten Plasmidbelastung analysiert. Anti-FVIII-Immunantworten waren bei Mäusen, die mit dem Plasmid behandelt wurden, das die FVIII-N2118Q-Variante trägt, signifikant reduziert.

CD4+T-Zell-Proliferation als Reaktion auf überlappende mannosylierte Peptide

(A) Überlappende Peptide, die die N2118-Stelle umgeben, 15 Aminosäuren lang, wurden mit Man6GlcNAc2-Anhängen mit hohem Mannose-Glykan synthetisiert. (B) CD4+-T-Zell-Proliferationsniveaus wurden als Reaktion auf die mannosylierten Peptide MP1 (linkes Feld), MP2 (mittleres Feld) und MP3 (rechtes Feld) und ihre nicht glykosylierten Gegenstücke (NGP1, NGP2 und NGP3) gemessen. Die Daten werden als Mittelwerte mit Standardabweichung aus drei separaten Experimenten (**P <0.01, ***P <0.001).

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