Frekvence, umístění a povaha vektorových inzercí AAV po dlouhodobém sledování dodávky transgenu FVIII v modelu psa s hemofilií
Přednosti z virtuálního kongresu ISTH 2020

Frekvence, umístění a povaha vektorových inzercí AAV po dlouhodobém sledování dodávky transgenu FVIII v modelu psa s hemofilií

Paul Batty1, Sylvia Fongová2Matteo Franco3Irene Gil-Farina3, Aomei Mo1, Lorianne Harpell1, Christine Houghová1, David Hurlbut1, Opatství Pender1, Sofia Sardo Infirri1Andrew Winterborn4, Manfred Schmidt3 a David Lillicrap1

1Ústav patologie a molekulární medicíny, Queen's University, Kingston, Ontario, Kanada.

2BioMarin Pharmaceutical, Novato, CA, USA.

3GeneWerk GmbH, Heidelberg, Německo.

3Služby péče o zvířata, Queen's University, Kingston, Ontario, Kanada.

Klíčové datové body

Tabulka vlevo ukazuje dávku, sérotyp kapsidy, hladiny FVIII a počet integračních míst (IS) pro 8 psů zahrnutých do studie. Deset let po infuzi byly hladiny FVIII u 2 z 8 zvířat <1% a pohybovaly se od 2.9% do 8.6% u ostatních 6 zvířat. Integrační místa byla analyzována pomocí 2 metod (sekvenování obohacení cíle, TES a PCR zprostředkovaná lineární amplifikací, LAM-PCR). Graf vpravo ukazuje relativní distribuci IS pro každé zvíře.

Genomická DNA ze 2 jaterních míst pro každé zvíře byla analyzována na integraci vektoru a genomu. Integrační formy (vektorový genom) tvořily 4.6% a epizomální formy (vektorový vektor) tvořily 95.4% čtených hodnot. Tyto výsledky ukazují, že expresní vektory si udržovaly převážně epizomální formu 10+ let po infuzi.

Tato tabulka ukazuje 10 nejběžnějších integračních míst (chromozom, velikost, gen a umístění) na základě metody TES. Na základě obou sekvenčních metod byly nejběžnější integrační místa nalezena v blízkosti KCNIP2, CLIC2, ABCB1 a F8 geny.

SOUVISEJÍCÍ OBSAH